抗單核細胞抗體試劑盒elisa說明書 實驗原理: 本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中血清素/血清胺(ST)水平。用純化的血清素/血清胺(ST)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST),再與HRP標(biāo)記的血清素/血清胺(ST)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清素/血清胺(ST)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準曲線計算樣品中血清素/血清胺(ST)濃度。 保存條件及有效期: 1.試劑盒保存:;2-8℃。 2.有效期:6 個月。 試劑盒特點: 1、高效、靈敏、特異的抗體; 2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性; 3、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體; 4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型; 5、節(jié)省實驗經(jīng)費。 標(biāo)本要求: 1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 樣本處理及要求: 1.血清:全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 2. 血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。 4. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 試劑盒性能: 1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。 2. 特異性:不與其它細胞因子反應(yīng)。 3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。 試劑盒組成 : 1、 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2、 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 標(biāo)準品(160pg/ml) 0.5ml×1瓶 3、 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 標(biāo)準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4、 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5、 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6、 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 操作步驟: 1.標(biāo)準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。 7.溫育:操作同3。 8.洗滌:操作同5。 9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘. 10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。 11.測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。 計算: 以標(biāo)準物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準物的濃度與OD值計算出標(biāo)準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 注意事項: 1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。 3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。 4.請每次測定的同時做標(biāo)準曲線,最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準品孔第一孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物請避光保存。 7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準. 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。
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