PCR檢測(cè)試劑盒對(duì)于不同的樣品有著不同的處理方法
點(diǎn)擊次數(shù):723 更新時(shí)間:2020-01-02
PCR檢測(cè)試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的試驗(yàn)辦法。由于其試劑安穩(wěn)、易保存,操作簡(jiǎn)便,成果判別較客觀等要素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)查驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA試劑盒回收率是反響待測(cè)物在樣品分析進(jìn)程中的損失的程度,損失越少,回收率越高。
通常我們可用于PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清或組織勻漿液等,不同類型的檢測(cè)樣本前期的處理方法是不一樣的。正確的處理樣本是保證檢測(cè)的正確性和準(zhǔn)確性的重要步驟,下面簡(jiǎn)單介紹一下。
1、血清是zui常用于PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)的一類樣本,處理也比較簡(jiǎn)單。
用無(wú)熱原、無(wú)內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本,將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜,使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的析出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
2、血漿
用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說(shuō)明書(shū),檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。
3、細(xì)胞裂解液
1)吸去培養(yǎng)板內(nèi)的培養(yǎng)基,用胰酶消化細(xì)胞,加適量培養(yǎng)基將細(xì)胞從培養(yǎng)板上吹下來(lái)。懸浮細(xì)胞可省略。
2)收集細(xì)胞懸液,1000×g離心10min,棄去培養(yǎng)基,用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。
3)加入適量的預(yù)冷PBS或細(xì)胞裂解液(臨用前加入蛋白酶抑制劑)重懸細(xì)胞。通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150~250μL PBS重懸。
4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,反復(fù)凍融幾次,使細(xì)胞充分裂解。也可將樣品進(jìn)行超聲破碎,以達(dá)到裂解的目的。