通用PCR試劑盒無(wú)需常規(guī)核酸提取即可進(jìn)行檢測(cè)
點(diǎn)擊次數(shù):588 更新時(shí)間:2021-04-14
通用PCR試劑盒指的是在PCR進(jìn)行的同時(shí),對(duì)其過程進(jìn)行監(jiān)測(cè)的能力(即實(shí)時(shí))。因此,數(shù)據(jù)可在PCR擴(kuò)增過程中,而非PCR結(jié)束之后,進(jìn)行收集。這為基于PCR的DNA和RNA定量方法帶來(lái)了變革。
在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中,反應(yīng)以循環(huán)中檢測(cè)到目標(biāo)擴(kuò)增的時(shí)間點(diǎn)為特征,而非在一定循環(huán)數(shù)后目標(biāo)分子素計(jì)的擴(kuò)增量。目標(biāo)核酸的起始拷貝數(shù)越高,則會(huì)越快觀察到熒光的顯著增加。相反,終點(diǎn)法檢測(cè)(也稱“讀板檢測(cè)”)測(cè)量的是PCR循環(huán)結(jié)束時(shí)素計(jì)的PCR產(chǎn)物量。
通用PCR試劑盒無(wú)需常規(guī)核酸提取,僅需對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單研磨、離心處理,即可開始后續(xù)核酸檢測(cè)。在保證檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的前提下,簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟,將檢測(cè)時(shí)間縮短至不到1小時(shí),成為適合于屠宰場(chǎng)、養(yǎng)殖場(chǎng)的技術(shù)。
通用PCR試劑盒“變性-退火-延伸”三個(gè)步驟的實(shí)現(xiàn)方法是:
1、變性:模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備;
2、退火:退火也叫復(fù)性,模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,在這個(gè)溫度下,模板DNA單鏈能夠與引物的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;所謂引物,是一段已經(jīng)確定好的DNA的片段,通過引物找到模板DNA的相應(yīng)位置,也就是確定了復(fù)制的起點(diǎn);
3、延伸:DNA模板-引物結(jié)合物在72℃、DNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應(yīng)原料,靶序列為模板,按照堿基互補(bǔ)配對(duì)原則和半保留復(fù)制原理,就能合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的復(fù)制鏈。
希望上述內(nèi)容能夠幫助大家更好的了解本試劑盒。