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脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測試劑盒

簡要描述:

脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品:phospho-P53(Ser376) 磷酸化瘤抑制基因P53抗體 規(guī)格: 0.1ml
TRP1/gp75 酪氨酸酶相關(guān)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Goat Anti-rabbit IgG/Alexa Fluor 488 Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml
GFOD2 葡萄糖果糖還原酶2抗體 規(guī)格:

更新時(shí)間:2022-02-16

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脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測試劑盒

使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

操作流程:

收集基因信息——>設(shè)計(jì)引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結(jié)果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實(shí)物保存。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測試劑盒

50T

FS-01H3877

 


操作流程.jpg

 

PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點(diǎn):

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR:

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。

外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。

定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測

組織一氧化氮合成酶總活性熒光定量檢測試劑盒  20次

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尿液一氧化氮合成酶總活性熒光定量檢測試劑盒  20次

細(xì)胞結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒  20次

組織結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒  20次

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒  20次

體液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒  20次

細(xì)胞誘導(dǎo)型巨噬細(xì)胞一氧化氮合成酶(iNOS /NOS2/mNOS)活性比色法定量檢測試劑盒  20次

組織誘導(dǎo)型巨噬細(xì)胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量檢測試劑盒  20次

血液誘導(dǎo)型巨噬細(xì)胞一氧化氮合成酶((iNOS /NOS2/mNOS))活性比色法定量檢測試劑盒  20次

脊髓灰質(zhì)炎病毒1型、2型和3型檢測試劑盒Rab17  RAS基因相關(guān)RAB17抗體 規(guī)格: 0.2ml

PIK3C3/PI3 kinase type 3  磷脂酰肌激3催化亞單位3抗體 規(guī)格: 0.1ml

SPHK1  鞘氨激1抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-Goat IgM/Cy3  Cy3標(biāo)記的兔抗羊IgM 規(guī)格: 0.1ml

CD172a/SIRP Alpha  信號調(diào)節(jié)α抗體 規(guī)格: 0.2ml

IL-6  白介6抗體 規(guī)格: 0.1mlDACH1  細(xì)胞命運(yùn)決定因子DACH1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-human IgG/PE  PE標(biāo)記的小鼠抗人IgG 規(guī)格: 0.1ml

BOK/Bcl 2 like protein 9  Bcl2樣凋亡9抗體 規(guī)格: 0.2ml

Galectin 8  半糖凝集8抗體 規(guī)格: 0.2ml

Lumican  基膜聚糖抗體 規(guī)格: 0.2mlNeuroligin 1  突觸細(xì)胞粘附分子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

GCDFP15  特異性囊病液體15抗體 規(guī)格: 0.2mlBeta-casein  β-酪抗體 規(guī)格: 0.2ml

Alpha B Crystallin/HSPB5  熱休克β5抗體 規(guī)格: 0.1ml

 


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