ELISA試劑盒嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮鬟^程，得出準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果
點(diǎn)擊次數(shù)：846 更新時(shí)間：2019-03-04
ELISA試劑盒嚴(yán)謹(jǐn)?shù)牟僮鬟^程，得出準(zhǔn)確的測(cè)試結(jié)果
ELISA試劑盒的基礎(chǔ)是抗原或者抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。同時(shí)結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體任然能夠保證其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時(shí)固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。同時(shí)因?yàn)槊傅拇呋l率很高，所以極大的放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
ELISA試劑盒的測(cè)試模式比較常見的有雙抗體夾心法，具體的測(cè)定方法如下：
1、首先用雙抗體之一在2-8℃的碳酸鹽緩沖液中過夜浸泡，形成固相抗體，洗滌去除沒有和固相結(jié)合或者結(jié)合的不牢固的抗體之后，用小牛血清或者牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分和雜質(zhì)。
2、加入需要測(cè)定的臨床樣本，溫育一定時(shí)間。等待需要測(cè)定的抗原就會(huì)和固相上特異抗體結(jié)合而吸附在固相上。
3、加入酶標(biāo)記的雙抗體之二，溫育一定時(shí)間。在固相上會(huì)形成雙抗體與特異抗原的夾心產(chǎn)物。
4、加入酶底物，溫育顯色測(cè)定。
ELISA試劑盒的這一方法我們有兩步溫育的步驟，我們平常稱之為“兩步法”，現(xiàn)在為了簡(jiǎn)化操作步驟，很多推出了“一步法”試劑盒，也就是將上述的2和3合并為了一步，但是雖然一步法相比兩步法操作簡(jiǎn)單，但是也有他的缺陷，容易造成勾狀效應(yīng)，出現(xiàn)假陰性或定量偏低的結(jié)果。
