產(chǎn)品列表PRODUCTS LIST
TRzol(總 RNA 提取試劑)( 紅 )公司正在出售的產(chǎn)品:EASYspin 組織 / 細胞 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)乙型流感病毒 Yamagata 系核酸檢測試劑盒EASYspin 植物 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)乙型流感病毒 Victoria 系核酸檢測試劑盒PLANTaid 植物 RNA 助提劑毒 H7N9 變異株( HPAI-H7)核酸檢
更新時間:2024-01-09
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-Hc2001 | TRzol(總 RNA 提取試劑)( 紅 ) | 50ml |
A-Hc2001 | TRzol(總 RNA 提取試劑)( 紅 ) | 50ml×2 |
產(chǎn)品介紹:TRzol試劑是直接從細胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性。加入氯仿后離心,樣品分成水樣層和有機層。RNA存在于水樣層中。收集上面的的水樣層后,RNA可以通過異丙醇沉淀來回收。
無論是人、動物、植物還是細菌組織,該方法對少量及大量的組織和細胞均有較好的分離效果。TRzol試劑操作上的簡單性允許同時處理多個的樣品。所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。TRzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白的污染。故而能夠做RNA印跡分析、斑點雜交、poly(A)+選擇、體外轉(zhuǎn)錄、RNA酶保護分析和分子克隆。
TRzol試劑能促進不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA通過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙錠染色,可見許多介于7 kb和15 kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb (28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A 260 /A 280 比值≥1.8。
產(chǎn)品儲存:TRzol在室溫下能穩(wěn)定保存12個月。盡管如此,為達到最佳效果,我們建議保存在2-8℃的環(huán)境下。
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備?
試劑:
模板DNA:PCR反應(yīng)需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應(yīng)的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應(yīng)需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應(yīng)具有緩沖作用,調(diào)節(jié)反應(yīng)pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應(yīng)特異性,從而提高反應(yīng)效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物;
設(shè)備:
PCR儀:用于控制反應(yīng)溫度,保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產(chǎn)物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是,只有在有序齊全的基礎(chǔ)上,才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗:
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:
一、變性:
利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性:
在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸:
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化:
1、變性溫度和時間:
保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高,產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低,產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間,可根據(jù)待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品:
TRzol(總 RNA 提取試劑)( 紅 ) | Pandemic2009H1N1 流感病毒 HA 基因核酸檢測試劑盒 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒(比色法) |
TRzol(總 RNA 提取試劑)( 無色 ) | 季節(jié)性流感病毒 H3N2 亞型 HA 基因核酸檢測試劑盒 | NAD激酶(NADK)測試盒(比色法) |
TRzol LS(液體樣本 RNA 提取試劑) | H7N9 亞型病毒 HA 基因核酸檢測試劑盒 | 乳酸脫氫酶(LDH)測試盒(比色法) |
RNApure 超純總 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I) | H7N9 亞型病毒 NA 基因核酸檢測試劑盒 | NAD蘋果酸脫氫酶(NADMDH)測試盒(比色法) |
EASYspin 全血 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I ) | 乙型流感病毒核酸檢測試劑盒 | NADP蘋果酸脫氫酶(NADPMDH)測試盒(比色法) |
EASYspin 組織 / 細胞 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I) | 乙型流感病毒 Yamagata 系核酸檢測試劑盒 | 線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ/NADH輔酶Q還原酶測試盒(比色法) |
EASYspin 植物 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I) | 乙型流感病毒 Victoria 系核酸檢測試劑盒 | NADH氧化酶(NOX)測試盒(比色法) |
PLANTaid 植物 RNA 助提劑 | 病毒 H7N9 變異株( HPAI-H7)核酸檢測試劑盒 | 檸檬酸合酶(CS)測試盒(比色法) |
病毒基因組 DNA/RNA 快速提取試劑盒 | 季節(jié)性流感病毒 H1N1 亞型 HA 基因核酸檢測試劑盒 | 乙醇含量測試盒(比色法) |
RNAclean RNA 清潔純化試劑盒 | 丙型流感病毒核酸檢測試劑盒 | 乙醇脫氫酶(ADH)測試盒(比色法) |
RNAfixer 無液氮 RNA 樣品儲存液 | 歐亞類禽豬流感病毒( EA-H1N1 )核酸檢測試劑盒 | 甲醛脫氫酶(FDH)測試盒(比色法) |
RNAsafe 高效 RNase 滅活劑 | 甲型流感病毒 / 乙型流感病毒核酸檢測試劑盒 | 乙醛脫氫酶(ALDH)測試盒(比色法) |
RNAlong RNA 長期保存液 | H7N9 亞型病毒核酸檢測試劑盒 / 含內(nèi)標 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒(比色法) |
RNase Away 即用型強力 RNase 滅活劑 | 季節(jié)性流感病毒 H3N2 亞型核酸檢測試劑盒 | NADP磷酸酶(NADPase)測試盒(比色法) |